研究论文
程遥，李少民，党诚学，周斌，宋永春，刁冬梅
目的 糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose，2DG)可以特异性阻断癌细胞Warburg效应发挥抗肿瘤作用，其靶点是葡萄糖转运蛋白(glucose transporter type 1，GLUT-1)。但GLUT-1的表达是否影响2DG的作用效率尚不得知，因此，笔者拟在食管癌细胞中证明GLUT-1的表达是否影响食管癌对2DG的敏感性及其可能的作用机制。方法 本研究通过体外试验，使用细胞转染技术过表达及敲除食管癌细胞GLUT-1蛋白，将细胞行2DG干预后，使用噻唑蓝比色[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]法测定细胞活性，酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法测定上清葡萄糖含量。并进一步使用免疫蛋白印迹(western blot，WB)法测定细胞内磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B，p-Akt)及LC3蛋白家族B(LC3-B)表达水平。结果 Eca-109和TE-1细胞中，GLUT-1高表达组72 h细胞数是空白对照组的1.44倍和1.46倍，葡萄糖消耗是空白对照组的1.62倍和1.39倍，GLUT-1低表达组的细胞数分别是相应空白对照组的59.4%和58.2%，葡萄糖消耗分别是空白对照组的33.1%和27.6%，组间差异均有统计学意义(P＜0.05)；加入2DG干预后，GLUT-1高表达组72 h细胞抑制率分别为56%及71%，葡萄糖消耗减少50%及49%，空白对照组的抑制率分别为43%及34%，葡萄糖消耗减少15%及27%，GLUT-1低表达组分别为28%及17%，葡萄糖消耗减少7%及9%，组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。使用LY294002阻断蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)通路后，两株细胞的组间差异均无统计学意义(P＞0.05)。WB法检测显示GLUT-1表达与p-Akt呈正相关，高表达GLUT-1的细胞LC3-B水平较低，使用2DG干预后，所有细胞LC3-B水平均明显增高，p-Akt表达显著降低。结论 食管癌细胞中，GLUT-1是2DG的作用靶点，其表达上调增强细胞对2DG的敏感性，Akt信号通路可能参与其相关机制。同时，2DG还可能通过Akt通路影响食管癌细胞的自噬水平，值得临床进一步研究和探索。
